Khi nghiên cứu insulin từ loài bò, được phân chia giữa hai chuỗi. Một trong số đó, chuỗi A, có 21 amino acid; chuỗi còn lại, chuỗi B, có 30 amino acid. Bằng các phương pháp kĩ thuật, người ta xác định được ở chuỗi B:
▪ Amino acid phenylalanine (Phe) là amino acid đầu N.
▪ Quá trình thủy phân với xúc tác chọn lọc thu được các mẩu peptide ngắn hơn.
⇝ Khi ghép các mẩu peptide lại thì thu được trình tự amino acid của chuỗi B.

Hình I. Sơ đồ cho thấy trình tự amino acid của chuỗi B của insulin bò có thể được xác định bằng cách chồng chéo các đoạn peptide.
Chuỗi A và B được nối với nhau bằng liên kết disulfide (–S–S–) giữa các gốc cysteine (Cys-Cys). Tập hợp các đoạn được sắp xếp theo trình tự tạo thành bản đồ peptide cho insulin.

Hình II. Trình tự amino acid trong insulin của loài bò.
Cấu trúc insulin hoàn chỉnh được thể hiện trong Hình II. Cấu trúc được hiển thị là cấu trúc của insulin bò. Đối với insulin của loài người, chuỗi A của người và bò chỉ khác nhau ở hai gốc amino acid; chuỗi B thì giống hệt nhau ngoại trừ amino acid ở đầu C.